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本试剂盒提供一种简单快速分离纯化口腔拭子样本总DNA的方法。该试剂盒采用可特异性结合DNA的硅基质膜和独特的缓冲系统，高效专一吸附DNA，每个拭子可得到0.5～3.5μg基因组DNA，提取的DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠。适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

• 向蛋白酶K中加入指定用量(1.25mL或5mL)的蛋白酶K储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
  
• 使用前若发现Buffer GL有沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴溶解。
  
• 全部离心步骤可在室温下进行。
  
• 取样：使用口腔拭子在口腔内壁擦拭6次，晾干2小时保存，为确保样本不被食物或饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。

• 将口腔拭子的棉签用剪刀从杆上剪下，置于2mL的离心管(自备)中，加入400μL Buffer GR。
  注意：如需无RNA污染的基因组DNA，可加入4μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液(100mg/mL)(货号：WE0225)，震荡混匀。
  
• 加入20μL蛋白酶K和400μL Buffer GL，立即涡旋震荡15秒，充分混匀。
  注意：加入Buffer GL后立即充分混匀；不可将蛋白酶K直接加入Buffer GL中使用。
  
• 56℃放置10分钟，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
  
• 加入400μL无水乙醇，涡旋震荡充分混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
  注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
  
• 将上步所得溶液和沉淀分两次加入到已装入收集管的吸附柱中，一次最多不超过700μL。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
  
• 12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
  注意：
  
• 将吸附柱置于一个新的1.5mL离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存。
  注意：
  
  • 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
    
  • 若需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。